Versuchsprotokoll: Messung der Stoffwechselaktivität/Proliferation von Zellen mit MTT (ePub)

Praktikumsbericht / -arbeit aus dem Jahr 2011 im Fachbereich Biologie - Humanbiologie, Note: 1, Philipps-Universität Marburg, Sprache: Deutsch, Abstract: Die Reaktionsfähigkeit von Zellen des angeborenen Immunsystems auf unterschiedliche Antigene stellt einen wesentlichen Teil einer schnellen und adäquaten Immunantwort dar. Aus diesem Grund ist es im Rahmen immunologischer Forschung grundlegend, die Responsivität von Zellen auf verschiedene Stimuli zu untersuchen. Diese Responsivität beruht generell auf der Ausstattung mit sog. "pattern recognition receptors" (PRR), zu denen beispielsweise die "toll like receptors" (TLR) gezählt werden, die nach Aktivierung über bestimmte Signalkaskaden eine erhöhte Transkription von Genen proinflammatorischer Zytokine induzieren.
Da die vermehrte Genexpression mit einer Steigerung der metabolischen Aktivität einhergeht, kann die Proliferationsrate einer Zellkultur als ein Maß für deren Responsivität in Bezug auf den verwendeten Stimulus herangezogen werden.
Der Nachweis dieser Stoffwechselaktivität erfolgt anhand diverser molekularbiologischer Methoden wie z.B. der Tetrazoliumsalz-Reaktion, die auf der Aktivität mitochondrialer Dehydrogenasen in viablen Zellen beruht. Diese Enzyme aus der Klasse der Oxidoreduktasen sind in der Lage, Tetrazoliumsalze zu Formazankristallen zu reduzieren, die anschließend photometrisch detektiert werden können. Dabei korreliert die Stärke der gemessenen Absorption mit der Aktivität der Dehydrogenasen und somit mit der Proliferationsrate der Zellen.